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富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠的影响

发布时间:2020-3-27 19:31:25 转载于:本站 编辑:谭许朋 梁慧嘉 杨永善 焦春伟 谢意珍

富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠的影响

谭许朋,梁慧嘉,恽 昊,杨永善,焦春伟,谢意珍1,2*

广东粤微食用菌技术有限公司,广东广州510663;广东省微生物研究所,广东省菌种保藏与应用重点实验室,省部共建华南应用微生物国家重点实验室,广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州510070)

摘 要:将60只雄性昆明小鼠随机分为6组:正常对照组、模型对照组、别嘌呤醇组、蛹虫草(Cordycepsmilitaris)组、富硒蛹虫草低剂量组和富硒蛹虫草高剂量组。采用次黄嘌呤灌胃联合氧嗪酸钾腹腔注射诱导小鼠构建高尿酸血症模型,测定降尿酸与抗氧化能力相关指标,探讨富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠血尿酸含量与抗氧化能力的影响。结果表明:与模型对照组相比,富硒蛹虫草低、高剂量组血清尿酸含量显著下

降,分别为(384.00±144.27)μmoL/L和(363.32±150.56)μmoL/L,血清总超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)水平均显著上升,同时血清丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量均显著下降;富硒蛹虫草高剂量组肝脏谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量与SOD水平均显著升高,富硒蛹虫草低、高剂量组肝脏 MDA含量均显著降低。因此,富硒蛹虫草不仅对高尿酸血症小鼠具有良好的降尿酸作用,而且能够增加其机体的抗氧化能力。

关键词:蛹虫草;富硒;高尿酸血症;抗氧化

近年来高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)的发病率日益增高[1],它不仅是痛风的发病基础,还与糖尿病、高血压、代谢综合征、慢性肾病等的发生发展密切相关[2-3]。在人机体内,尿酸是嘌呤代谢的终产物,也是重要的内源性抗氧化物质,参与清除机体产生的自由基[4],但在病理状态下,高浓度的尿酸会参与氧化应激反应[5]。尿酸的持续产生伴随着大量的超氧阴离子[6],降低血清尿酸水平以及提高机体抗氧化能力可以在一定程度上减轻HUA模型小鼠肝脏和肾脏器质性病变的发生[7]。别嘌呤醇作为黄嘌呤氧化酶抑制剂,目前是治疗高尿酸血症的主要药物,但因它会造成严重的肾脏损伤,大大地限制了其临床应用[8]。因此,临床上急需具有降尿酸作用,同时还能提高机体抗氧化能力,而又不对机体器官产生损伤反应的HUA治疗方案。

蛹虫草(Cordyceps militaris)具有降尿酸作用[9],硒是人体必需的微量元素,是人体多种酶的活性中心,具有一定的抗氧化功效[10]。富硒蛹虫草是通过生物发酵手段将纳米硒富集于蛹虫草菌丝体中的发酵产物。本研究通过灌胃次黄嘌呤联合腹腔注射氧嗪酸钾构建高尿酸血症小鼠模型,研究富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠的血尿酸及机体抗氧化能力的影响,研究结果将为富硒蛹虫草开发降尿酸和抗氧化的健康产品提供科学参考。

1 材料与方法

1.1菌株

  蛹虫草(C.militaris)CS~A和富硒蛹虫草CS~8均由广东粤微食用菌技术有限公司提供。

1.2实验动物

  SPF级昆明小鼠60只,雄性,体重17~19,5~7周龄,广东省医学实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK(粤)2013-0002。

SHAPE \* MERGEFORMAT

收稿日期:2018-04-24原稿;2018-06-06修改稿

基金项目:广州经济技术开发区、广州高新技术产业开发区、广州出口加工区、广州保税区创业创新领军人才项目

(2017-l181)和广州市科技计划项目(201604016051)

作者简介:谭许朋(1990-),男,硕士,主要从事食药用真菌药理药效评价。

本文通信作者 E-mail:Jiao1900205@126.com

1.3主要材料和试剂

  别嘌呤醇为日本TCI公司产品;次黄嘌呤、氧嗪酸钾均为美国阿拉丁工业公司产品;尿酸(uricacid,UA)、肌酐(creatinine,CREA)、尿素(carbamide,UREA)、丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)试剂盒均为深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司产品;微量还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)测试盒为南京建成生物工程研究所产品;总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和脂质过氧化(malonicaldehyde,MDA)检测试剂盒均为上海碧云天生物技术有限公司产品。BS-480全自动生化分析仪为深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司产品;Infinite M200PRO多功能酶标仪为瑞士Tecan公司产品;RE-6000A旋转蒸发器购自上海亚荣生化仪器厂。

1.4样品制备

  取富硒蛹虫草干品100,加入8倍体积纯化水,加热回流2次,每次2h,回流提取液用布氏漏斗抽滤后,收集滤液,旋转蒸发浓缩至约100mL,冷冻干燥为干粉,干燥密封避光保存备用。硒含量

(120.94μg/)由广州金域医学检验集团股份有限公司检测完成。

1.5高尿酸血症小鼠模型构建

  60只雄性昆明小鼠,许可证编号:SYXK(2016-156),12h昼夜节律,温度20~24,湿度50%~

60%,自由饮食饮水,小鼠维持饲料购自广东省医学实验动物中心,于广东省微生物研究所动物中心SPF级动物房检疫观察和适应性饲养7d,随机分为6组:正常对照组、模型对照组、别嘌呤醇组、蛹虫草组、富硒蛹虫草低剂量组100m/(k·d)、富硒蛹虫草高剂量组200m/(k·d)。每天造模前小鼠禁食不禁水1h,除正常对照组外,其余各组灌胃次黄嘌呤500m/(k·d)和腹腔注射氧嗪酸钾300m/(k·d),连续7d。同时,正常对照组灌胃等体积纯化水10mL/(k·d)和腹腔注射等体积生理

盐水10mL/(kg·d)。

小鼠在构建模型0、2、4、6d称重。每天构建模型1h后,各组小鼠灌胃给予相应的受试物:正常对照组和模型对照组按10mL/kg灌胃等体积纯化水,别嘌呤醇组按5m/kg剂量灌胃浓度为0.5m/mL的别嘌呤醇,蛹虫草组按200m/kg剂量灌胃浓度为20.0m/mL的蛹虫草,富硒蛹虫草低剂量组按100m/kg剂量(硒摄入量为12.09μg/k)灌胃浓度为10.0m/mL的富硒蛹虫草,富硒蛹虫草高剂量组按200m/kg剂量(硒摄入量为24.19μg/k)灌胃浓度为20.0m/mL的富硒蛹虫草。

1.6血清生化指标检测

  于构建模型给药的第7天给药1h后,小鼠眼眶后静脉丛采血,血液静置30min,4,1200 g离心

15min,分离血清,-20保存备用。按照试剂盒说明书方法测定尿酸、CREA、UREA、ALT、AST、

GSH、SOD、MDA的水平。

1.7肝脏生化指标检测

  取血后迅速摘除小鼠肝脏称重,切肝大叶组织,按照19(质量体积,/mL)加生理盐水,匀浆(频率:65Hz,时间:60s),4,3000 g离心20min,取上清液,-20保存备用。按照试剂盒说明书方法测定GSH、SOD、MDA的水平。

1.8统计学处理

SHAPE \* MERGEFORMAT

  所有数据均以x±s表示。多组间均数比较采用单因素方差分析,组间均数两两比较,方差齐时采用最小显著性差异法(LSD)法,方差不齐时采用Dunnetts T3法。由SPSS 19.0软件完成,α=0.05。

2 结果与分析

2.1高尿酸血症小鼠体重变化曲线

  在7d的实验周期内,正常对照组与模型对照组比较,小鼠体重变化没有显著性差异;模型对照组与富硒蛹虫草低、高剂量组和蛹虫草组比较,小鼠体重变化也没有显著性差异;别嘌呤醇组从给药第2天体重开始下降,第4天体重显著低于正常对照组和模型对照组,组间差异有统计学意义(图1)。

##与正常对照组相比差异极显著;**与模型对照组相比差异极显著

##and**indicate significant differences at P<0.01compared with the normal control group and model group,respectively图1 富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠体重的影响

Fig.1 Effect of SCM on body weight of HUA mice

2.2高尿酸血症小鼠血清尿酸、CREA、UREA、ALT、AST的水平

  与正常对照组相比,模型对照组小鼠血清尿酸含量明显升高,说明模型构建成功。与模型对照组比较,富硒蛹虫草低、高剂量组,蛹虫草组以及别嘌呤醇组血清尿酸含量均极显著降低,且这些组的组间血清尿酸含量均没有明显差异(图2),表明富硒蛹虫草具有良好的降尿酸作用,但是在受试剂量范围内未见明显的剂量依赖性。与正常对照组或模型对照组比较,别嘌呤醇组小鼠血清CREA、UREA、ALT、AST的水平均显著升高,其余各组间的水平无明显的差别,说明别嘌呤醇对动物肝脏和肾脏有一定的损伤作用,但蛹虫草与富硒蛹虫草在受试剂量范围内未发现有肝脏和肾脏损伤作用(表1)。

Footnotes as in Fig.1

图2 富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠血清尿酸含量的影响

Fig.2 Effect of SCM on serum UA level of HUA mice

表1 富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠血清CREA、UREA、ALT和AST水平的影响Table 1 Effect of SCM on serum ALT,AST,CREA and UREA level of HUA mice

组别

Group

肌酐

CREA(μmol/L)

尿素 UREA(μmol/L)

丙氨酸氨基转移酶

ALT(U/L)

天门冬氨酸氨基转移酶

AST(U/L)

正常对照组

Normal control

57.47±4.12 

6.11±1.25 

33.98±6.29 

109.01±19.22

模型对照组

Model control

60.12±4.41 

7.10±2.25 

33.23±5.26 

120.08±16.47

别嘌呤醇组

Allopurinol

86.72±18.81##**

28.37±14.95##**

46.42±15.33##**

164.78±50.67##**

蛹虫草组

militaris

57.83±3.65 

7.20±1.83 

33.22±4.34 

105.99±19.51

富硒蛹虫草低剂量组

SCM low dose

57.85±2.51 

6.96±1.55 

31.67±3.18 

108.51±8.64

富硒蛹虫草高剂量组

SCM high dose

58.05±3.05 

7.45±1.57 

35.19±4.68 

101.68±15.99

注同图1

Footnotes as in Fig.1

2.3高尿酸血症小鼠血清GSH、SOD以及MDA的水平

  GSH含量在各组间没有明显差异;别嘌呤醇组SOD活性较低,为(0.19±0.11)U,并与正常对照组和模型对照组间均存在极显著性差异,富硒蛹虫草低、高剂量组与模型对照组比较有显著性差异,分别为(0.63±0.03)U和(0.64±0.05)U;别嘌呤醇组MDA含量较高,为(13.81±2.87)μmol/L,并与正常对照组间存在极显著性差异,模型对照组含量次之,并与正常对照组间存在显著性差异,富硒蛹虫草低、高剂量组与模型对照组相比存在极显著和显著性差异,随剂量的增加,MDA含量增加,低剂量组为(9.57±1.64)μmol/L,高剂量组为(10.22±1.26)μmol/L(表2)。结果表明,高尿酸血症小鼠表现出一定的氧化过激反应,别嘌呤醇对高尿酸血症有治疗作用,但对机体抗氧化能力没有促进作用,反而会导致机体脂质过氧化损伤,富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠血清抗氧化能力具有一定的提高作用,但是在受试剂量范围内未见明显的剂量依赖性。

表2 富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠血清GSH、SOD与MDA水平的影响

Table 2 Effect of SCM on serum GSH,SOD and MDA level of HUA mice

组别 Group

还原型谷胱甘肽

GSH(μmol/L)

总超氧化物歧化酶

SOD(U)

丙二醛

MDA(μmol/L)

正常对照组

Normal control

17.43±3.68 

0.59±0.09 

10.50±1.79

模型对照组

Model control

17.48±0.76 

0.48±0.15 

12.73±2.56

别嘌呤醇组

Allopurinol

17.32±2.12 

0.19±0.11##**

13.81±2.87##

蛹虫草组

militaris

15.64±1.45 

0.49±0.16 

11.84±1.32

富硒蛹虫草低剂量组

SCM low dose

17.17±0.74 

0.63±0.03

9.57±1.64**

富硒蛹虫草高剂量组

SCM high dose

16.31±1.40 

0.64±0.05

10.22±1.26

与正常对照组相比差异显著;与模型对照组相比差异显著;##与正常对照组相比差异极显著;**与模型对照组相比差异极显著

andindicate significant differences at P<0.05compared with the normal control group and model group,respectively;##and

**indicate significant differences at P<0.01compared with the normal control group and model group,respectively

2.4高尿酸血症小鼠肝脏GSH、SOD、MDA水平

  与正常对照组或模型对照组比较,除富硒蛹虫草高剂量组外,GSH含量在各组间均没有明显差异;与正常对照组或模型对照组比较,SOD水平除别嘌呤醇组和富硒蛹虫草高剂量组外,其余各组均没有明显差异;与正常对照组比较,模型对照组小鼠肝脏 MDA含量极显著升高;与模型对照组比较,别嘌呤醇组与蛹虫草组小鼠肝脏MDA含量没有显著变化;富硒蛹虫草低、高剂量组小鼠肝脏MDA含量显著降低(表3)。结果表明,富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠肝脏抗氧化能力具有一定的提高作用,且具有一定的剂量依赖性。

表3 富硒蛹虫草对高尿酸血症小鼠肝脏GSH、SOD与MDA水平的影响Table 3 Effect of SCM on liver GSH,SOD and MDA level of HUA mice

组别

Group

还原型谷胱甘肽

GSH(μmol/g prot)

总超氧化物歧化酶

SOD(U/g prot)

丙二醛

MDA(μmol/g prot)

正常对照组

Normal control

32.63±5.16 

0.48±0.15 

1.57±0.28**

模型对照组

Model control

33.66±2.88 

0.47±0.10 

2.18±0.43##

别嘌呤醇组

Allopurinol

32.68±7.41 

0.28±0.05##**

2.15±0.51

蛹虫草组

militaris

31.15±4.87 

0.51±0.17 

1.95±0.45

富硒蛹虫草低剂量组

SCM low dose

34.04±3.81 

0.48±0.04 

1.78±0.25

富硒蛹虫草高剂量组

SCM high dose

40.44±7.09##**

0.76±0.22##**

1.78±0.41

注同表2

Footnotes as in Table 2

3 讨论

  尹艳艳等[11]研究表明,蛹虫草对高尿酸患者具有良好的降尿酸作用。胡芳等[9]研究表明,蛹虫草有明显的抗高尿酸血症作用,其作用机制与其抑制黄嘌呤氧化酶活性,抑制尿酸合成有关,有效成分有待进一步分析。硒具有一定的抗氧化功效[10],谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)是含硒酶,它的活性中心为硒代半胱氨酸,硒在生物体内的抗氧化作用主要通过GSH-Px实现。郭静成等[12]研究表明,硒对GSH-Px活性及GSH含量均具有影响,硒处理可以在一定程度上提高高等植物的GSH-Px活性。王明洋等[13]研究表明,硒对杏鲍菇(Pleurotus eryngii)子实体中GSH-Px的活性具有积极作用,当培养料中硒含量在40~50m/kg时,GSH-Px、SOD、过氧化氢酶活性显著增强。在人体中尿酸为嘌呤的最终产物,而在啮齿类动物小鼠体内尿酸可以被尿酸酶分解。尿酸达到一定水平时其浓度高低与人体中的MDA含量呈一定的正相关[14],MDA含量可以反映机体脂质过氧化的程度。

SOD是机体重要的抗氧化酶,其活性反映机体清除氧自由基的能力,而GSH是体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂,含量高低同样反映机体抗氧化的能力[15]。SU等[16]研究发现氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症大鼠体内的SOD活性显著下降,MDA水平显著增高,并且认为高尿酸水平诱导的氧化应激是诱导肾损伤的分子基础。

本研究表明,富硒蛹虫草能够有效控制次黄嘌呤联合氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠的血尿酸,并且能够显著的提升动物机体的抗氧化能力,减少脂质过氧化反应,增加清除氧自由基的能力,因此富硒蛹虫草在降尿酸与抗氧化功能产品开发中具有一定的潜力。

参考文献

[1]          李静.高尿酸血症的流行病学研究[J].中国心血管杂志,2016,21(2):83-86.

[2]          GRASSI D,FERRI L,DESIDER G,et al.Chronic hyperuricemia,uric acid deposit and cardiovascular risk[J].

Current Pharmaceutical Design,2013,19(13):2432-2438.

[3]          DOHERTY M,JANSEN T L,NUKI G,et al.Gout:why is this curable disease so seldom cured?[J].Annals of

the Rheumatic Diseases,2012,71(11):1765-1770.

[4]          KURRA V,ERARANTA A,JOLMA P,et al.Hyperuricemia,oxidative stress,and carotid artery tone in

experimental renal insufficiency[J].American Journal of Hypertension,2009,22(9):964-970.

[5]          吴丽,王林元,刘畅,等.利湿活血方对高尿酸血症大鼠血尿酸及抗氧化能力的影响[J].世界中医药,2017,12(1):

134-137,141.

[6]          史珅,张泽生,张民,等.苹果多酚对高尿酸血症大鼠抗氧化能力的影响[J].现代生物医学进展,2010,10(18):

3460-3463.

[7]          刘佳.普洱茶多酚对高尿酸血症小鼠降尿酸和抗氧化作用的研究[D].昆明:昆明理工大学,2016.

[8]          陈晴,铁远,胡咏川,等.抗痛风相关的高尿酸血症药物的研究进展[J].中国临床药理学杂志,2017,33(9):853-856.

[9]          胡芳,汪鋆植,於洪建,等.蛹虫草防治高尿酸血症的实验研究[J].中成药,2013,35(8):1779-1782.

[10]     姚昭,李红艳,张云龙,等.有机硒、无机硒、VE单独使用及有机硒与VE联用对大鼠体内抗氧化能力的影响[J].

食品科学,2013,34(15):272-276.

[11]     尹艳艳,吴萍萍,朱宝君,等.蛹虫草对高尿酸患者降尿酸作用的病例分析[J].时珍国医国药,2014,25(10):

2437-2438.

[12]     郭静成,尹顺平.硒对高等植物中谷胱甘肽过氧化物酶活性及谷胱甘肽含量的影响[J].西北植物学报,1998,18

(4):533-537.

[13]     王明洋,方勇,裴斐,等.硒对杏鲍菇营养品质和抗氧化酶活性的影响[J].食品科学,2016,37(11):208-213.

[14]     李葵花,李璐,许士奇,等.无症状高尿酸血症大鼠血液流变学和氧化应激[J].医用生物力学,2017,32(1):88-91.

[15]     罗鹏,吴应宽,蒋宪瑶.急性砷中毒小鼠血清中NO、GSH、MDA及总抗氧化能力的实验研究[J].中国地方病学杂

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